CD63-EGFP标记外泌体/外泌体包裹重组外源蛋白/一环膜蛋白3包装外泌体的制备

2023-03-06 来源 : 生活

直到现在瑞禧生物小编要给大家整理互动的是CD63-EGFP标识外泌体/外泌体裹重组外源蛋白/跨越微管3包装外泌体的制备，四人来看！

肝窦内皮巨噬细胞（LSEC)是肝常驻抗体提排列成巨噬细胞，可所则有门静脉滴之中的抗体化学物质，可借肝乃至胸部的特异性抗体耐受。肾脏来源不明的外泌体则有肾脏特异或相关性抗体，具有刺激抗体应答和可借抗体耐受的双重作用。由于外泌体尺寸很小，基本上研究课题缺少用显微的方依此并不需要检视外泌体与LSEC的相互作用。

方依此

通过抗体磁珠分选LSEC，密度梯度离心纯化肠道败滴症CT26.WT巨噬细胞培养液来源不明的外泌体，紫外光染料DiI标识后，使用CLSM并不需要检视LSEC 在活体今后泌体的所则有。广泛应用新技术方依此协作CT26-DsRed/EGFP-Exo遗传工程巨噬细胞，创设CT26-DsRed/EGFP-Exo肠道败滴症原位荷瘤仿真，广泛应用CLSM“可视化”研究课题在滴液环境下LSEC对败滴症来原外泌体的所则有。

结果

经anti-CD146抗体磁珠分遴选的LSEC 在扫描电镜下具特征性“窗孔”结构上，FCM检测结果显示CD146+ LSEC之中超过80%的巨噬细胞为VWF阳性。LSEC贴壁后，排列成特征性铺路石样外观。用超速离心依此分离出的CT26.WT巨噬细胞培养液来源不明的外泌体，透射电镜下表现为具有双层膜结构上的囊泡，直径在30~100nm之间，Western blot和抗体胶体金检测均声称其富则有外泌体的标志蛋白CD63。紫外光染料DiI并不需要标识外泌体，命名为Exo-DiI。在LSEC培养体系之中加人Exo-Dil，CLSM下可见LSEC胞质内慢慢地用到Exo-DiI，排列成深蓝色蓝绿色紫外光，指明LSEC 在活体可较快所则有外泌体。经肠道叉静脉注射Exo-DiIl后，制备肾脏的水腌渍，CLSM下可见anti-VWFFTTC标识的LSEC同Exo-DiI位于肝滴窦内相同区外,指明LSEC可较快所则有肝滴窦之中的外泌体。利用anti-CD146抗体磁珠分离纯化LSEC，经anti-vWF-FITC染色前驱CLSM下检视，可见LSEC之中所则有有Exo-DiI，有利于声称LSEC并不需要较快所则有流经肝滴窦的外泌体。

CT26-DsRed/EGFP-Exo遗传工程巨噬细胞在CLSM下，深蓝色紫外光蛋白DsRed将巨噬细胞整体标识为深蓝色，CD63-EGFP将多泡体标识为绿色，在融合图形上排列成黄色蓝绿色。创设CT26-DsRed/EGFP-Exo肠道败滴症原位荷瘤仿真，合肾脏该组织的水腌渍，CLSM下可见深蓝色的肾脏实质内存在CD63-EGFP标识的多泡体，而无紫外光标识的肾脏间质之中也存在CD63-EGFP标识的外泌体，指明肾脏实质向周围环境囚禁外泌体。仿真鼠门脉滴涂片可检测到滴液之中有绿色的EGFP-Exo外泌体存在。仿真鼠肾脏的水腌渍可见肝窦胸部存在绿色的EGFP-Exo外泌体，指明败滴症该组织囚禁的EGFP-Exo外泌体循门脉滴回流至肾脏，被肾脏之中包括LSEC在内的巨噬细胞内所所则有。有利于广泛应用anti-CD146抗体磁珠自仿真鼠分遴选LSEC，置CLSM下检视，可见分离纯化的CD146* LSEC巨噬细胞所则有了CT26-DsRed/EGFP-Exo肾脏该组织来源不明的EGFP-Exo外泌体。